HYDROPHOBIC PEPTIDE TAGS - As tools in bioseparation and investigation of recombinant proteins

Abstract: Popular Abstract in Swedish Många framsteg har gjorts inom bioteknik de senaste decennierna. Idag kan vissa sjukdomar fastställas redan på DNA-nivå och viktiga läkemedel samt tvättmedelskomponenter tillverkas industriellt med hjälp av gentekniska tekniker. Kostnaden för de gentekniska produkterna ligger till stor del i själva uppreningsprocessen. Forskningen i denna avhandling har gjorts med avsikt att utveckla nya metoder samt förbättra redan befintliga tekniker för att rena upp gentekniska proteiner. I genteknik kan man använda sig av bakterier för att producera proteiner. En bakterie är en levande organism som själv ombesörjer allt, från värmeförsörjning till rörelse, bara den får näring. Man skulle kunna jämföra en bakterie med en fabrik. Här sköts allt från kundordern (genomet, d.v.s. DNA:t) till färdig produkt (protein), bara energi tillförs så att maskineriet fungerar. Med gentekniska tekniker kan man förändra bakteriens DNA och på så sätt tvinga bakterien att producera ett protein som normalt inte existerar i bakterien. I en vanlig bakterie finns över 2000 olika proteiner, som bakterien behöver för att kunna fungera. För att kunna urskilja och hitta vårt önskade protein kan vi märka det. Protein kan märkas så att de syns i en blandning, på samma sätt som en turistguide kan bära ett paraply för att synas i en större folkmängd. I min forskning har jag gentekniskt märkt proteiner med små handtag som ger proteinet unika egenskaper. Dessa egenskaper kan utnyttjas för att ”fiska upp” det önskade proteinet ur en proteinblandning. Svårigheten är att designa handtagen så finurligt som möjligt att målproteinet effektivt kan avskiljas från föroreningar. Handtagen som fästs på målproteinet får inte skada eller förstöra målproteinets naturliga egenskaper. Lyckades jag? Visst har jag lyckats designa flera olika handtag (hydrophobic peptide tags) och gentekniskt satt dem på mina önskade proteiner (lactate dehydrogenase, LDH, och green fluorescent protein, GFPuv). Mina proteiner har då fått speciella egenskaper och dessa har undersökts och utnyttjas för upprening av proteiner, vilket beskrivs i avhandlingen. Förutom design av handtag har ett nytt ”fiskespö” utvecklats, det vill säga den fasta yta som fångar upp proteinerna (HBVE/BVE medium).